Аллофикоцианин

Аллофикоцианин — «другой», φύκος — «водоросль», и κυανός — «голубой») — светособирающий белок из семейства фикобилипротеинов, в которое так же входят фикоцианин, фикоэритрин и фикоэритроцианин, и является вспомогательным пигментом для хлорофилла. Все фикобилипротеины растворимы в воде и следовательно не могут быть закреплены на мембране как каротиноиды, а вместо этого формируют закреплённые на мембране кластеры, называемые фикобилисомами. Аллофикоцианин поглощает и излучает красный свет, и легко обнаруживается у цианобактерий и красных водорослях. Способность фикобилинов испускать свет используется в наборах иммунологического анализа. Аллофикоцианин довольно часто используют в проточной цитометрии, при счёте и сортировке клеток, и микроскопии. Для этого в него внедряют химическую сшивку.

Строение

Аллофикоцианин можно выделить из разных видов красных или сине-зелёных водорослей, каждый из которых синтезирует свою, несколько отличающуюся от других форму этой молекулы. Белок состоит из двух типов субъединиц (α и β), каждая несёт по одной хромофорной группе фикоцианобилина. Общую формулу белка можно описать как (αβ)₃. Молекулярная масса аллофикоцианина 105 кДа.

Спектральные характеристики

Сшитый аллофикоцианин

Как упоминалось выше, чтобы использовать аллофикоцианин в иммунологическом анализе, его необходимо химически сшить, чтобы предотратить диссоциацию его субъединиц, что довольно часто происходит в стандартных физиологических буферах. Традиционным методом для этого служит смешивание с 1-этил-3,3-диметиламинопропилом — мощным сшивочным агентом. Затем его обрабатывают восьми молярным раствором мочевины, а затем дают ренатурировать, но уже в физиологическом буфере. Такая процедура позволяет избавится от несшившихся субъединиц. Существуют альтернативные способы, использование которых позволяет сохранить нативную структуру тримера и получить более яркий конечный продукт.